一、概述及分类
肠杆菌科是由多个菌属组成,生物学性状相似,均为革兰氏阴性杆菌,这些细菌常寄居在人和动物的消化道,并随粪便排出体外,广泛分布在水和土壤中,大多数肠道杆菌属于正常菌群。当机体**力降低或侵入肠道外组织时,成为条件致病菌而引起**。部分肠道杆菌是致病菌。例如:产毒大肠埃希氏菌、伤寒沙门氏菌、各种志贺氏菌可使人患肠道传染病。
肠杆菌科细菌种类繁多,主要根据细菌的形态,生化反应,抗原性质以及核酸相关性进行分类。肠杆菌科的细菌分为20个属。
1、 什么是大肠菌群?
大肠菌群名称并非细菌分类命名,而是卫生细菌领域的用语,它不代表某一个或某一属细菌,而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌,这些细菌在生化反应及血清学方面并非完全一致。
大肠菌群:需氧及兼性厌氧,在37℃能分解乳糖,产酸,产气的革兰氏染色阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括:大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。目前已被国内外广泛应用于评价食品卫生质量的重要指标之一。
2、 什么是大肠杆菌?
埃希氏菌属的代表菌种是大肠埃希氏菌。大肠埃希氏菌俗称大肠杆菌,它是人类和动物肠道正常菌群的成员,随粪便排到自然界,并污染食品,本菌是组成水、食品中大肠菌群成员之一,其数目多少代表粪便污染和程度。
能引起肠道感染的大肠埃希氏菌有下列五个病原群
(1)肠产毒性大肠埃希氏菌(ETEC)产生ST、LT、引起婴儿、旅游者腹泻。
(2)肠致病性大肠埃希氏菌(EPEC)寄居十二指肠、回肠、空肠。引起婴儿腹泻。
(3)肠侵袭性大肠埃希氏菌(EIEC)有侵袭力,痢疾样症状。
(4)肠出血性大肠埃希氏菌(EHEC)引起出血性结肠炎,主要菌型O157。
(5)肠粘附性大肠埃希氏菌(EAEC)损害肠细胞外**,引起小儿顽固性腹泻。
3、 什么是大肠杆菌O157:H7?
EHEC O157:H7属于肠杆菌科埃希氏菌属。它是肠出血性大肠杆菌(EHEC)的主要血清型。
二、流行病学:
(一) 流行概况:
E.coli O157:H7引起的出血性结肠炎是1982年在美国俄勒岗州和密执安州,因食用汉堡包引起的食物中毒的病人粪便中被分离并命名的。据美国**控制中心(CDC)报告,每年国内约发现2万多例病人。死亡人数200-500人,以后陆续在全球五大州20多个国家被发现或引起暴发和流行。自82年发现至今,发生规模*大的一次爆发是97年5 月下旬,日本冈山、广岛等县几十所中学和幼儿园相继发生6起集体食物中毒事件,人数多达1600人,导致3名儿童死亡,住院儿童达80人。同时日本仙台和鹿儿岛形成中毒人数过万人,死亡11人,波及44个都府县的爆发性食物中毒,引起全世界的关注。此外美国、加拿大、瑞典、澳大利亚、苏格兰、威尔士等国家和地区也相继报道了EHEC的散发性感染和暴发流行。
我国1988年**分离到E.coli O157:H7。从已有的流行病学调查资料看,我国也存在散发病例,还没有爆发流行的报道。近几年也通过监测,先后从牛、猪、羊、粪便,肉类等食品中查到E.coli O157:H7。
(二)、流行特点:
1.季节性:多发生于夏秋两季6-9月为发病高峰。11月至次年2 月极少发病。
2.地区分布:多发生于发达国家,主要以散发性为主。
3.易感人群:儿童5-9岁、老人50-59岁明显高于其它年龄组,*小3个月,*大85岁。
4.宿主:农场动物牛、羊、猪、鸡、马、鹿、鸽子、海鸥等均可能为大肠杆菌
O157的携带者。
5.食源性E.coli O157:H7感染:牛肉、生奶、鸡肉及其制品,蔬菜、水果及制品等均可引起污染,其中牛肉是*主要的传播载体。
三、生物学特征
1.形态与染色:革兰氏染色阴性,无芽胞,有鞭毛。
2.培养特性:*适生长温度为33-42℃,37℃繁殖迅速,44-45℃生长**,45.5℃停止生长。
3.抵抗力:具有较强的耐酸性,pH2.5-3.0,37℃可耐受5小时;耐低温,能在冰箱内长期生存;在自然界的水中可存活数周至数月;不耐热,75℃1分钟即被灭活;对氯敏感,被1mg/L的余氯浓度杀灭。
4.生化反应:除不发酵或迟缓发酵山梨醇外,其他常见的生化特征与大肠埃希氏菌基本相似,但也有某些生化反应不完全一致。
5.EHEC除其代表菌株O157:H7外,还包括O157:NM、O26:H11、O111:H8、O125:NM、O121:H19、O45:H2、O4:NM、O145:NM、O5:NM、O91:H21、O103:H2、O113:H2等血清型的部分菌株。血清学鉴定包括O抗原和H抗原的鉴定。前者可使用玻片凝集试验或胶乳凝集试验;后者则应先进行动力试验,动力活泼者再进行玻片和试管凝集试验。
四、致病性:
1、 致病因素:
E.coli O157:H7的另一个显著特征是可产生大量的Vero**(VT),也称作类志贺氏**(SLT),是EHEC的主要致病因子。Vero**按**原性等方面的不同可分为VT1和VT2。该**有一个A亚单位和5~6个B亚单位组成。B亚单位与宿主肠壁细胞糖脂受体结合,具有**活性的A亚单位进入细胞,改变60s核糖体的组分,干扰蛋白质的合成。编码VT的基因位于噬菌体上,可缺失而不产生VT。
2、所致**:
(1) 轻度腹泻
(2) 出血性结肠炎(HC)
(3) 溶血性尿毒综合症(HUS)
(4) 血栓性血小板减少性紫癜(TTP)
E.coli O157:H7的感染剂量极低。伏期为3-10天,病程2-9天。通常是突然发生剧烈**和水样腹泻,数天后出现出血性腹泻,可发热或不发热。部分患者可发展为HUS、TTP等, 严重者可导致死亡。
五、E.coli O157:H7的检验
(一) 国标法(常规法)
1、增菌培养
2、分离
3、鉴定
(二) 金标试纸法
该方法是中华人民共和国卫生部频布的“关于国内肠出血性大肠杆菌O157:H7感染性腹泻应急处理预案”中的指定方法。
将样品经过特殊的前增菌及增菌后,取120ul的增菌培养液放入试纸夹的样品槽中,样品由于毛细管作用移至反应区,反应区中含有特殊的抗体(E.coli O157:H7抗体)它与胶体金颗粒共轭偶联。如果样品中存在抗原,将同金标抗体结合形成抗原-抗体复合物,沿着硝酸纤维素膜向前移动至含有固定的抗E.coli O157:H7抗体区域(T区),金标**的复合物与该区域的抗抗体发生特异性结合形成一条可见的线。其它的样品继续移动到膜的未端,*终进入废物池被遗弃。
反应区也含有金标结合的一种**抗原(颜色指示剂),不管样品中有没有E.coli O157:H7抗原,它都被样品洗脱。金标控制指示剂通过膜移动到阴性控制区与**抗体结合形成一条可见的线。无论样品中有没有E.coli O157:H7抗原,控制线都将在控制区(C区)形成,来确保试验正常进行。
增菌液滴入8-10分钟后,观察试纸C区和T区有无明显的线。在C和T区都有可见的线,则结果为阳性。C区有线、T区无线,则结果为阴性。如C区无线,无论T区有没有线,则实验无效。