深圳菲特立科技有限公司推出德国**微生物快速检测系统RVLM ,可快速定量的检测各类致病菌。详情请登陆www.szfitly.com 活菌总数;
大肠菌群;
大肠杆菌;
肠道杆菌科;
金黄色葡萄球菌;
绿脓杆菌;
沙门氏菌;
李斯特菌;
肠球菌;
亚硫酸盐还原梭状芽孢杆菌;
产气荚膜梭菌;
霉菌(曲霉属**、曲霉菌);
酵母菌。
前 言 本标准代替GB/T 4789.2-2008《食品卫生微生物学检验 菌落总数测定》。
本标准与GB/T 4789.2-2008相比，主要修改如下：
——修改了标准的中英文名称；
——修改了菌落总数计算公式中的解释；
——修改了培养基和试剂；
——删除了**法 菌落总数PetrifilmTM 测试片法。
本标准的附录A是规范性附录。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为：
——GB 4789.2-1984、GB 4789.2-1994、GB/T 4789.2-2003、GB/T 4789.2-2008。
《食品微生物学检验 菌落总数测定》
1 范围
本标准规定了食品中菌落总数（Aerobic plate count）的测定方法。
本标准适用于食品中菌落总数的测定。
2 术语和定义
2.1 菌落总数 aerobic plate count
食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。
3 设备和材料
除微生物实验室常规**及培养设备外，其他设备和材料如下：
3.1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。
3.2 冰箱：2 ℃～5 ℃。
3.3 恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。
3.4 天平：感量为0.1 g。
3.5 均质器。
3.6 振荡器。
3.7 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。
3.8 无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL。
3.9 无菌培养皿：直径90 mm。
3.10 pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸。
3.11 放大镜或/和菌落计数器。
4 培养基和试剂
4.1 平板计数琼脂培养基：见附录A 中A.1。
4.2 磷酸盐缓冲液：见附录A 中A.2。
4.3 无菌生理盐水：见附录A 中A.3。
5 检验程序
菌落总数的检验程序见图1。
图
1 菌落总数的检验程序6 操作步骤
6.1 样品的稀释
6.1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质1 min～2 min，或放入盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。
6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。
6.1.3 用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头**不要触及稀释液面），振摇试管或换用1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。
6.1.4 按6.1.3 操作程序，制备10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1 次1 mL 无菌吸管或吸头。
6.1.5 根据对样品污染状况的估计，选择2 个～3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10 倍递增稀释时，吸取1 mL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。
6.1.6 及时将15 mL～20 mL 冷却至46 ℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46 ℃±1 ℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。
6.2 培养
6.2.1 待琼脂凝固后，将平板翻转，36 ℃±1 ℃培养48 h±2 h。水产品30 ℃±1 ℃培养72 h±3 h。
6.2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4 mL），凝固后翻转平板，按6.2.1 条件进行培养。
6.3 菌落计数
可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units，CFU）表示。
6.3.1 选取菌落数在30 CFU～300 CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30 CFU 的平板记录具体菌落数，大于300 CFU 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。
6.3.2 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。
6.3.3 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。
7 结果与报告
7.1 菌落总数的计算方法
7.1.1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）样品中菌落总数结果。
7.1.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式（1）计算：
（1）式中：
N = ΣC /(n1+0.1 n2 )d
N——样品中菌落数；
ΣC——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；
n1——**稀释度（低稀释倍数）平板个数；
n2——**稀释度（高稀释倍数）平板个数；
d——稀释因子（**稀释度）。
示例：
稀释度 1:100（**稀释度） 1:1000（**稀释度）
菌落数（CFU） 232，244 33，35
上述数据按7.2.2数字修约后，表示为25000或2.5×104。
7.1.3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于300 CFU，则对稀释度*高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以*高稀释倍数计算。
7.1.4 若所有稀释度的平板菌落数均小于30 CFU，则应按稀释度*低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
7.1.5 若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1 乘以*低稀释倍数计算。
7.1.6 若所有稀释度的平板菌落数均不在30 CFU～300 CFU 之间，其中一部分小于30 CFU 或大于300CFU 时，则以*接近30 CFU 或300 CFU 的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
7.2 菌落总数的报告
7.2.1 菌落数小于100 CFU 时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。
7.2.2 菌落数大于或等于100 CFU 时，第3 位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2 位数字，后面用0 代替位数；也可用10 的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。
7.2.3 若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。
7.2.4 若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。
7.2.5 称重取样以CFU/g 为单位报告，体积取样以CFU/mL 为单位报告。
附录A
（规范性附录）
培养基和试剂
A.1 平板计数琼脂（plate count agar，PCA）培养基
A.1.1 成分
胰蛋白胨 5.0 g
酵母浸膏 2.5 g
葡萄糖 1.0 g
琼 脂 15.0 g
蒸馏水 1000 mL
pH 7.0±0.2
A.1.2 制法
将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。分装试管或锥形瓶，121 ℃高压**15 min。
A.2 磷酸盐缓冲液
A.2.1 成分
磷酸二氢钾（KH2PO4） 34.0 g
蒸馏水 500 mL
pH 7.2
A.2.2 制法
贮存液：称取34.0 g的磷酸二氢钾溶于500 mL蒸馏水中，用大约175 mL的1 mol/L氢氧化钠溶液调节
pH，用蒸馏水稀释至1 000 mL后贮存于冰箱。
稀释液：取贮存液1.25 mL，用蒸馏水稀释至1 000 mL，分装于适宜容器中，121 ℃高压**15 min。
A.3 无菌生理盐水
A.3.1 成分
氯化钠 8.5 g
蒸馏水 1 000 mL
A.3.2 制法
称取8.5ｇ氯化钠溶于1 000 mL蒸馏水中，121 ℃高压**15 min。